обмен отдельных аминокислот в норме

343,58 Kb.НазваниеТема: Обмен и функции аминокислотстраница2/3Дата конвертации17.11.2012Размер343,58 Kb.Тип   2   3.1. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИННОГО АЗОТА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ НИНГИДРИНОВЫМ МЕТОДОМ. ПРИНЦИП МЕТОДА: Свободные a-аминокислоты образуют с нингидрином фиолетовое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна количеству свободных аминокислот. ХОД РАБОТЫ: В центрифужную пробирку отмеривают 1 мл сыворотки и 1 мл 1Н СН3СООН, хорошо перемешивают, закрывают пробкой и кипятят 20 мин в водяной бане. Центрифугируют 20 мин 1500 об/мин. 0,4 мл центрифугата помещают в мерные пробирки, затем прибавляют 4 мл фосфатного буфера (рН=6,8) и 0,5 мл 1% водного раствора нингидрина. Содержимое пробирки перемешивают и ставят в кипящую водяную баню. Окраска развивается в течение 40 мин, переходя от буровато-грязного цвета к лиловому и дальше к фиолетовому. Пробирки охлаждают и доводят объем дистил. водой до 7 мл. Колориметрируют при зеленом светофильтре в кювете шириной слоя 5 мл. Количество аминного азота находят по прилагаемой таблице. Норма составляет 2,96 a 0,1 мг%.Практическое занятие ЂЂЂ11. Задание к занятию ЂЂЂ11. Тема: Обмен и функции аминокислот. Учебные и воспитательные цели: -Общая цель занятия: научить использовать знания о различных процессах, в ходе которых может образовываться аммиак, о механизмах его обезвреживания, знать биосинтез и роль креатина, креатин- фосфата в синтезе АТФ, а также уметь использовать эти знания в практической деятельности врача. - Частные цели: уметь определять количество мочевины в сыворотке крови, креатинина в моче и выделять креатин из мышечной ткани. 1. Входной контроль знаний: 1.1. Тесты. 1.2. Устный опрос. 1.3. Реферативные сообщения. 2. Основные вопросы темы: 2.1. Образование аммиака в организме и пути его обезвреживания. Гипераммониемия. 2.2. Биосинтез мочевины как основной механизм предотвращения накопления аммиака. Клиническое значение определения мочевины. 2.3. Синтез креатина, креатин-фосфата, значение этого синтеза для организма. Клиническое значение определения креатинина. 2.4. Особенности обмена отдельных аминокислот (глицин, метионин, глутаминовая и аспарагиновая кислоты, триптофан, фенилаланин). 2.5. Нарушения в обмене отдельных аминокислот. 2.6. Патология азотистого обмена. 3. Лабораторно-практические работы: 3.1. Определить количество мочевины в сыворотке крови. 3.2. Определить количество креатинина в моче. 3.3. Выделить креатинин из мышечной ткани. 4. Выходной контроль 4.1. Ситуационные задачи. 5. Литература: 5.1. Материал лекций. 5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 1990г., с. 350-354, 364-368. 5.3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 2004г., с. 447-464. 2. Основные вопросы темы2.1. Образование аммиака в организме и пути его обезвреживания. Гипераммониемия.Аммиак в организме образуется в результате дезаминирования аминокислот, биогенных аминов и нуклеотидов. Часть аммиака образуется в кишечнике в результате действия бактерий на пищевые белки (гниение). Концентрация аммиака в крови в норме ЂЂЂ 0,4-0,7мг/л. Это токсичное соединение, поэтому аммиак не накапливается, а вступает в реакцию с глутаминовой или аспарагиновой кислотами с образованием индифферентной транспортной формы ЂЂЂ глутамина или аспарагина.+NН3 НООС-(СН2)2-СН-СООН Н 2NОС-(СН2)2-СН-СООН NН2 АТФ NН2 -Н 2О глутаминовая кислота глутамин +NН3 НООС-СН2-СН-СООН Н2NОС-СН2-СН-СООН АТФ NН2 -Н 2О NН2 аспарагиновая кислота аспарагин В почках глутамин под влиянием глутаминазы расщепляется с образованием аммиака, идущего на нейтрализацию кислых соединений с образованием аммонийных солей. Этот процесс является одним из механизмов регуляции кислотно-щелочного равновесия в организме и сохранения важнейших катионов (Na+, K+) для поддержания осмотического давления. Глутамин ЂЂЂ основной донор азота в организме. Амидный азот глутамина используется для синтеза пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов, аспарагина, аминосахаров, белков, глюкозы. Также источниками образования аммиака служат процессы: дезаминирования биогенных аминов; распад пиримидиновых оснований (урацил, тимин, цитозин); дезаминирования аминокислот; дезаминирования пуриновых оснований (гуанина и аденина). Пути использования аммиака в организме: Синтез аминокислот из соответствующих кетокислот: АТФ СН3-С-СООН + NН3 СН3-СН-СООН О NН2 ПВК аланин Синтез аммонийных солей в почках. Синтез пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Синтез мочевины ЂЂЂ основной путь обезвреживания аммиака. ГИПЕРАММОНИЕМИЯ. Повышение содержания аммиака в крови до 6000мкмоль/л (норма-60мкмоль/л) оказывает токсическое действие на организм. Причины: генетический дефект ферментов орнитинового цикла в печени; вторичное поражение печени в результате цирроза, гепатита и др. Симптомы: тошнота, повторяющаяся рвота, потеря сознания, отек мозга, отставание умственного развития. Все симптомы гипераммониемии ЂЂЂ проявление действия аммиака на ЦНС. Для диагностики производят определение содержания аммиака в крови, метаболитов орнитинового цикла в крови и моче, активность ферментов печени.2.2. . Биосинтез мочевины как основной механизм предотвращения накопления аммиака. Клиническое значение определения мочевины.Еще в прошлом веке русские ученые М.В. Ненцкий и С.С. Салазкин показали, что в печени происходит образование мочевины из углекислого газа и аммиака. Кребс и Гензеляйт установили, что синтез мочевины представляет собой циклический процесс, в котором ключевым соединением, замыкающим цикл, является орнитин. Кохен и Ратнер выяснили, что начальной реакцией этого цикла является синтез карбамоилфосфата. В печени аммиак связывается с СО2 с образованием карбамоилфосфата под действием карбамоилфосфатсинтетазы. Затем под действием орнитин-карбамоилтрансферазы карбамоильная группа карбамоилфосфата переносится на орнитин и образуется цитруллин. В следующей реакции аргининосукцинатсинтетаза связывает его с аспартатом и образуется аргининоянтарная кислота. Аспартат ЂЂЂ источник второго атома азота мочевины. Далее происходит расщепление аргининоянтарной кислоты на аргинин и фумарат (идет в ЦТК). Аргинин гидролизуется под действием аргиназы на орнитин и мочевину. Образующийся орнитин взаимодействует с новой молекулой карбамоилфосфата, и цикл замыкается. Первые две реакции происходят в митохондриях гепатоцитов. Затем цитруллин транспортируется в цитозоль, где и осуществляются дальнейшие превращения. Орнитиновый цикл в печени выполняет 2 функции: 1. превращение азота аминокислот в мочевину, которая экскретируется и предотвращает накопление токсичных продуктов - аммиака; 2. синтез аргинина и пополнение его в организме. Отмечается, что у детей первых месяцев жизни функция печени развита недостаточно, что проявляется в том, что у ребенка количество аммиака по сравнению с взрослым человеком увеличено в 2-2,5 раза. У новорожденных ЂЂЂ 20-30% общего азота падает на азот мочевины. Мочевина ЂЂЂ безвредное для организма соединение. Главным местом ее образования в организме является печень, где есть ферменты мочевинообразования. В головном мозге имеются все ферменты синтеза мочевины, кроме карбамоилфосфатазы, поэтому в нем мочевина не образуется. Мочевина ЂЂЂ основной конечный продукт азотистого обмена, в составе которого из организма выделяется до 90% всего выводимого азота. В норме экскрекция мочевины ЂЂЂ 25-30 г/сут. При повышении колич

3.1. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИННОГО АЗОТА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ НИНГИДРИНОВЫМ МЕТОДОМ - Тема: Обмен и функции аминокислот